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注:

*原注射以前需要收集一些正常血0清,已备检测*0体时作为阴性对照。待兔子在新环境中稳定,大概需要四天左右时间,可以进行耳动脉取血。取血量约5ml足矣。

免0疫用的*原必须纯化,否则影响*0体的质量。*原经FCA或FIA充分乳化后才能注射。将*原液与佐剂等比例混合后,置于混合器上使之剧烈振荡使*原充分乳化,乳化过程比较费时、费力,但若乳化不充分,会影响免0疫的效果,振荡后,1000rpm离心一分钟,如水相和油相不分层即可注射。首0次免0疫用FCA,以后都用FIA。

免0疫方法可采用背部多点注射法。即于家兔脊柱两旁选4-6点皮下0注射,每点注0.1ml,间隔2周后再于上述部位选不同点注射(不要选择临近位点,否则*愈合不好)。每次免0疫的*原量约100μg。免0疫次数在四五次即可,*原用量大可以减少次数。



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三聚体G蛋白就是通过这样的循环来实现分子信号的“开”与“关”,大鼠*小鼠IgM,从而使得信号能够得到正确有效的传导。 NewEast Biosciences的科学家发明了一种高度灵敏的基于特异性单*0体的检测方法。该方法基于能够特异性识别GTP结合状态的三聚体G蛋白或者小G蛋白的单*0体,利用方便快捷的*盒,能够迅速检测出G蛋白是否处于状态。该方法除了具有简单、易操作、灵敏度高等优点以外,还有一个为吸引人的优势:具有到被固定的细胞内的G蛋白的活化状态的可能性。而这正是很多研究G蛋白信号转导的科学家所梦寐以求的功能。目前,该类型*盒已经被100多篇高水平研究所引用。随着这些检测方法的普及,G蛋白信号转导的研究进展必将进一步加快。




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单克0隆*0体(单*制备)制备过程有以下几个步骤:


步骤一:细胞免0疫

免0疫动物免0疫动物是用目的*原免0疫小鼠,使小鼠产生致敏B淋巴细胞的过程。 一般选用6-8周龄雌性Balb/c小鼠,按照预先制定的免0疫方案进行免0疫注射。 *原通过血液循环或淋巴循环进入外周免0疫器0官,刺激相应B淋巴细胞克0隆,使其活化、增殖,并分化成为致敏B淋巴细胞。

步骤二:细胞融合

采用眼球摘除放血法处死小鼠,无菌操作取出脾0脏,在平皿内挤压研磨,制备脾细胞悬液。 将准备好的同系骨0髓瘤细胞与小鼠脾细胞按一定比例混合,并加入促融合剂聚乙 二醇。在聚乙 二醇作用下,各种淋巴细胞可与骨0髓瘤细胞发生融合,形成杂交瘤细胞。





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