动物细胞培养-商洛细胞-英瀚斯(查看)
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- 名称南京英瀚斯生物科技有限公司 【公司网站】
- 所在地中国
- 联系人 戴经理
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价格
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- 采购量 不限制
- 发布日期 2022-02-02 10:11 至 长期有效
动物细胞培养-商洛细胞-英瀚斯(查看)产品详情
成纤维细胞分离方法
1.处死孕鼠,全身置于75%酒精里浸泡,然后在超净台中用剪刀和镊子将孕鼠皮肤剪开,用另外- -组剪刀、镊子剪开腹部肌层,露出,后用第三组剪刀和镊子将小心取出放在盛有D-PBS的玻璃平皿中,冲洗去血。
2.用两把弯镊子将胚胎外的胞膜小心去除,然后夹掉头和内脏,将其余胚胎转移到一个装有30 ml D-PBS的50 ml离心管中,轻轻颠倒两次,倒掉D-PBS,商洛细胞,再重复此步骤一次,注意要留少许D-PBS,细胞实验室,然后将胚胎转移到另- -装有D-PBS的平皿中,并用手术刀片将其细细切碎。
3. 用200 μ的移液反复、快速地吹打平皿中的液体,转移至15 ml离心管中,于4C 1500 rpm离心5分钟,动物细胞培养,倒掉上清,以10 ml胰酶重悬沉淀,放在37C水浴中消化30分钟,且每隔五分钟轻轻晃动,使之充分消化。
4.将上层细胞悬液倒入一个装有10 ml MEF生长培养基的50 ml离心管中,用200目的尼龙网过滤后,以1500 rpm离心5分钟收集细胞,再用30 ml MEF生长培养基洗涤两次。
5.细胞沉淀用15 ml MEF生长培养基重悬后进行细胞计数(- -般8只14天的胎鼠可获得2-3x107细胞)。
6. 3x106细胞悬浮于15 ml MEF生长培养基中,接种到200 ml培养瓶中。
7. 24小时后更换新鲜的MEF生长培养基。
8.细胞长满后,先用D-PBS冲洗,倒掉后加胰酶消化(此步时间不宜过长,作者- -般不超过五分钟),按1:5传代。
9. 细胞再次长到覆盖率80-90%左右, 将其消化后,常规冻存(冻存液要现配)。
什么是脂质体?脂质体转染的原理和步骤?
细胞转染的方法主要包括:电穿孔法、显微注射、*、*钙共沉淀法、脂质体转染法、多种阳离子物质介导、病毒介导的转染等,理想的细胞转染方法是具有高转染效率、对细胞的毒性作用小等。
一、脂质体 (liome) 转染方法原理
脂质体 (liome) 转染方法原理:脂质体 ((Iiome) 作为体内和体外输送载体的工具,已经研究的十分广泛,用合成的阳离子脂类包裹 DNA,同样可以通过融合而进入细胞。使用脂质体将 DNA 带入不同类型的真核细胞,与其它方法相比,有较高的效率和较好的重复性的。
中性脂质体是利用脂质膜包裹 DNA,借助脂质膜将 DNA 导入细胞膜内。带正电的阳离子脂质体,DNA 并没有预先包埋在脂质体中,而是带负电的 DNA 自动结合到带正电的脂质体上,形成 DNA-阳离子脂质体复合物,从而吸附到带负电的细胞膜表面,经过内吞被导入细胞。
yao物对细胞的IC50检测
IC50 (half maximal inhibitory concentration)是指被测量的拮*剂的半*浓度。它能指示某一yao物或者物质(yi制剂)在*某些生物程序(或者是包含在此程序中的某些物质,比如酶,细胞受体或是微生物)的半量。在凋亡方面,可以理解为一定浓度的某种药wu诱导肿liu细胞凋亡50%,该浓度称为50%*浓度,即凋亡细胞与全部细胞数之比等于50%时所对应的浓度,细胞实验外包,IC50值可以用来衡量yao物诱导凋亡的能力,即诱导能力越强,该数值越低,当然也可以反向说明某种细胞对yao物的耐受程度。
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