内源性过氧化物酶阻断剂-博特龙技术有限公司(图)

操作步骤

石蜡切片

1. 脱蜡：二甲0苯，室温，2 次，每次 5～10min。

2. 水合 100%、100%、95%、90%、80%、70%乙醇、蒸馏水，每级 3min。

3. 在洗涤缓冲液中润洗 10min。

4. 如有必要，封闭内源性过氧化物酶（含 0.3% H2O2 无水甲0醇）

5. 继续通用步骤。

冰冻切片

1. 空气中干燥切片，至少 1hr

2. 用前用合适的固定液固定，如果要延长保存时间，固定后在空气中干燥 1hr。 单独包装在铝箔袋中，–70°C 干燥保存，用前从冰箱取出，室温放置至少 1hr。

3. 浸入洗涤缓冲液中 10～15min。

4. 如有必要，封闭内源性过氧化物酶（含 0.3% H2O2 无水甲0醇）。

5. 继续通用步骤。

注意事项

1. 用辣根过氧化物酶时不要使用含有叠氮钠的*。

2. 避免使用含次氯酸的去污剂。

3. 设阳性对照、阴性对照和*对照。

4. 不要使用卵清蛋白作为切片粘连剂，内源性过氧化物酶阻断剂，使用明胶或多聚赖氨酸。

5. 孵育过程中不要使片子干掉。

6. 洗涤后洗涤液尽量去净。

7. 用低熔点石蜡以减少*原变性（gt; 60°C）。

8. 用新鲜配制的 4%缓冲*可更好保存*原活性。

1. 检测细胞或组织中是否含有内源性过氧化物酶的方法：将组织切片水化后，加入底物DAB，如果变为棕色，说明组织切片含有过氧化物酶，需要封闭内源性过氧化物酶活性。

2.检测细胞或组织中是否含有内源性碱性*酶的方法：将组织切片水化后，加入底物BCIP/NBT，如果变为棕色，说明组织切片含有内源性碱性酶，需要封闭其活性。

3.影响过氧化物酶的分子有血红素蛋白如红细胞中的血红蛋白，肌肉细胞中的肌红蛋白，粒细胞和单核细胞中的细胞色素及肝0脏和shen脏之中的触媒。