流式细胞检测结果分析-英瀚斯生物科技公司-海南细胞
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- 名称南京英瀚斯生物科技有限公司 【公司网站】
- 所在地中国
- 联系人 戴经理
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- 采购量 不限制
- 发布日期 2021-12-09 10:10 至 长期有效
流式细胞检测结果分析-英瀚斯生物科技公司-海南细胞产品详情
磁性细胞标记方式
应用MACS技术进行磁性细胞分选重要的一点是高质量的标记。要尽可能地增强阳性细胞的标记,并减弱背景染色。有两种基本的磁性标记方式:直接标记和间接标记。
1、直接磁性细胞标记(Direct magnetic cell labeling)
(磁珠结合的细胞就是所要分离获得的细胞)直接标记是快速、*特异的磁性标记方法。目前有多种分选人、小鼠、大鼠以及非人类灵长类细胞的MACS直标微珠可供选用。
2、间接磁性细胞标记(Indirect magnetic cell labeling )
(磁珠结合不需要的细胞,游离于磁场的细胞为所需细胞)间接磁性细胞标记需要联合使用单ke隆或者多ke隆*ti和MACS间标微珠。未结合*ti、生物素化*ti或者荧光素标记*ti均可作为一*标记细胞,再使用*免yi球蛋白微珠、*生物素或链霉亲和素微珠、*荧光素微珠作为二*磁性标记细胞。几乎针对任何种系任何细胞的任何一种单*或多*,均可用于间接标记。间接标记主要在如下情况时选用:当没有直标磁珠时;需要用几种*ti的混合物同时分选或去除多种类型的细胞;间接标记有放大作用,因此可在磁性分选*原表达弱的目的细胞时使用;使用自备或者配体的磁珠分选中。( -般而言,阴性分离法的磁珠用量比阳性分离法的大,阳性分离法用行更多。)
小鼠精原gan细胞分离富集和培养
成年小鼠gao丸中约有108个细胞,其中约有 2×104个是精原gan细胞,仅占gao丸生精上皮细胞总数的 0.02~0.03%,精原gan细胞数量太少不利于体外培养.分离和富集精原gan细胞成为精原gan细胞体外培养能否成功的前提条件.寻找分离和富集小鼠精原gan细胞有效方法. 方法:出生6-8天小鼠为实验对象,先用0.25%胰酶1mM EDTA消化gao丸10min,用胎牛xue清终止消化,用一次40-um孔径的滤器过虑制成单 细胞悬液,30%percoll不连续密度梯度法离心富集精原gan细胞,再根椐未分化精原gan细胞表面thy1.2(CD90.2)阳性CD117(c- kit)阴性特点用流式细胞仪将精原gan细胞分选出来,并在体外进行培养尝试. 结果:30%percoll密度梯度离心前CD117(c-kit)阳性细胞占13.80±3.34%,CD90.2阳性细胞占28.98±4.51%, 二者都阳性细胞占8.98±2.98%,CD117阴性CD90.2阳性细胞占18.36±2.67%;离心后 CD117(c-kit)阳性细胞占12.37±3.34%,流式细胞检测结果分析,CD90.2阳性细胞占56.98±4.51%,二者都阳性细胞占 8.20±3.98%,CD117阴性CD90.2阳性细胞占32.36±3.67%;CD117(c-kit)阳性细胞和二者都阳性细胞所占百分比前后 比较差异无显著性(Pgt;0.1),CD90.2阳性细胞和CD117阴性和CD90.2阳性细胞所占百分比前后比较差异有显著性 (Plt;0.05);采用CD117和CD90.2作为标志分子,percoll离心后细胞悬液经FACS分选后获得细胞纯度
平板克l隆形成实验基本步骤::
1、取对数生长期的各组细胞,流式细胞检测,分别用0.25%胰 蛋白酶消化并吹打成单个细胞,并把细胞悬浮在10%胎牛的DMEM培养液中备用。
2、将细胞悬液作梯度倍数稀释,每组细胞分别以每皿50、100、200 个细胞的梯度密度分别接种含10mL 37预温培养液的皿中,并轻轻转动,使细胞分散均匀。置37团5% CO2及饱和湿度的细胞培养箱中培养2~3周。
3、经常观察,海南细胞,当培养皿中出现肉眼可见的时,终止培养。弃去上清液,用PBS小心浸洗2次。加4%*固定细胞5mL固定15分钟。然后去固定液,加适量GIMSA应用染色液染10~30分钟,然后用流水缓慢洗去染色液,空气干燥。
4、将平皿倒置并叠加一张带网格的透明胶片,用肉眼直接计数,或在显微镜(低倍镜)计数大于10个细胞的数。后计算形成率。形成率= (数/接种细胞数) x100%平板形成试验方法简单,适用于贴壁生长的细胞。适宜底物为玻璃的、塑料瓶皿。试验成功的关键是细胞悬液的制备和接种密度。细胞一定要分散得好,不能有细胞团,接种密度不能过大。平板形成试验方法简单,适用于贴壁生长的细胞。适宜底物为玻璃的、塑料瓶皿。试验成功的关键是细胞悬液的制备和接种密度。细胞- -定要分散得好,不能有细胞团,接种密度不能过大。
流式细胞检测结果分析-英瀚斯生物科技公司-海南细胞由南京英瀚斯生物科技有限公司提供。南京英瀚斯生物科技有限公司在技术合作这一领域倾注了诸多的热忱和热情,英瀚斯一直以客户为中心、为客户创造价值的理念、以品质、服务来赢得市场,衷心希望能与社会各界合作,共创成功,共创*。相关业务欢迎垂询,联系人:戴经理。
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