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生物安全柜的工作原理主要是将柜内空气向外抽吸，使柜内保持负压状态，通过垂直气流来保护工作人员；外界空气经空气过滤器( high-efficiency particulate air filter, HEPA过滤器)过滤后进入安全柜内，以避免处理样品被污染；柜内的空气也需经过HEPA过滤器过滤后再排放到大气中，以保护环境。
二级生物安全柜 附加特性说明：
采用高亮度、高分辨率彩色液晶显示器，动画模拟显示安全柜状态。
具有预约与定时功能。
具有照明灯累计运行时间、灯累计运行时间、风机累计运行时间纪录。
新增照明灯累计运行时间超过5000小时更换提示（可清除）。
新增灯累计运行时间超过500小时更换提示（可清除）。
新增过滤器使用寿命显示。
新增遥控控制风机、照明灯、灯、前视窗升降功能。
新增时钟设置与实时显示功能。

A1型安全柜前窗气流速度小量或测量平均值应至少为0.38m/s。70%气体通过HEPA过滤器再循环至工作区，30%的气体通过排气口过滤排出。A2型安全柜前窗气流速度小量或测量平均值应至少为0.5m/s。70%气体通过HEPA过滤器再循环至工作区，30%的气体通过排气口过滤排出。二级B型生物安全柜均为连接排气系统的安全柜。连接安全柜排气导管的风机连接紧急供应电源，目的在断电下仍可保持安全柜负压，以免危险气体泄漏出实验室。其前窗气流速度小量或测量平均值应至少为0.5m/s(100fpm)。

生物安全柜在使用上要注意什么
生物安全柜是在一些高危实验过程中所需要使用的实验设备，因此在使用过程当中需要。按照他的一些使用方式来进行，否则就会导致它的使用效果不理想。威胁到实验者的人身安全以及对环境会有所污染。一般而言，我们的实验者在使用生物安全柜之前需要详细的阅读，生物安全柜的使用操作指南。这样才能确保在时间的过程当中，生物安全柜按照规定在进行相关的实验，保证实验的安全。

B1型70%气体通过排气口HEPA过滤器排除，30%的气体通过供气口HEPA过滤器再循环至工作区。B2型为全排型安全柜，无内部循环气流，可同时提供生物性和化学性的安全控制，可以操作挥发性和挥发性核物作为添加剂的微生物实验。生物安全柜是为生物安全防护等级为4级实验室而设计的，柜体完全气密，工作人员通过连接在柜体的手套进行操作，根据生物安全柜的强制性行业标准《中华国医药行业标准YY0569-2005生物安全柜》规定，只有获得国家食品药品监督颁发的注册证的产品才能保护操作人员、实验室环境和操作样本。
而在对生物安全柜进行清洁消毒时，用户还应注意以下两点：
1、由于剩余的培养基可能会使微生物生长繁殖，因此在实验结束时，包括仪器设备在内的生物安全柜里的所有物品都应清除表面污染，并移出安全柜。
2、在使用前后，要清除生物安全柜内表面的污染。工作台面和内壁要用进行擦拭，所用的要能够安全柜里可能发现的任何微生物。而在每天实验结束时，也应对生物安全柜做擦拭工作。生物安全柜起到的是保护作用，用户在购置时应根据自身实际选择合适的机械设备，而在使用时，则应明确操作规范，并对其进行定期的消毒清洁。安全生产从平时做起，只要用户做好相应的安全防护工作，生物安全柜也将发挥大效用，筑起坚实的围墙。