预混PCR酶-友名生物(推荐商家)

不对称PCR(asymmetric PCR）枝术

两种引物浓度比例相差较大的PCR技术称不对称PCR.在扩增循环中引入不同的引物浓度.常用50~ 100 1比例。在起初的10~ 15个循环中主要产物还是双链DNA.但当低浓度引物被消耗尽后。高浓度引物介导的PCR反应就会产生大量单链DNA.

应用:可制备单链DNA部分片段用于序列分析或核酸杂交的探针。

反转录PCR(reverse transcription， RT- PCR技术

当扩增模板为RNA时。需先通过反转录酶将其反转录为cDNA才能进行扩增。RT - PCR应用非常广泛。无论是分子生物学还是临床检验等都经常采用。

修饰引物PCR技术

为达到某些特殊应用目的.如定向克1隆、定1点突变、体外转录及序列分析等。可在引物的5*-端加上酶切位点、突变序列、转录启动子及序列分析结合位点等。

PCR有哪些应用领域？

*表达

通常可通过PCR来检测不同细胞类型、组织和生物体在特定时间点的*表达差异。首先，从目标样品中分离出RNA并将mRNA逆转录成cDNA。随后，通过由PCR扩增的cDNA数量，确定mRNA的初始水平。这一过程也被称为逆转录PCR。

终点PCR 可通过凝胶里的扩增产物条带强度对RNA的表达进行定量（一种半定量方法）。例如，对起始cDNA进行连续稀释并扩增。通过凝胶电泳使不同起始量的终点PCR得率可视化，然后对条带强度进行定量，并以管家*为参照进行标准化，预估扩增靶点的相对表达水平。如今，终点PCR已基本被实时PCR 或qPCR 取代了，因为它们可获得和的*表达定量结果。

PCR引物设计的基本原则

引物长度：15-30bp，常用为20bp左右。

引物碱基：G C含量以40-60%为宜，G C太少扩增效果不佳，G C 过多易出现非特异条带。ATGC建议随机分布，避免5个以上的*呤或嘧1啶核苷酸的成串排列参照。

引物内部不应出现互补序列。

两个引物之间不应存在互补序列，尤其是避免3 ′端的互补重叠。

引物与非特异扩增区的序列的同源性不要超过70%，

引物3′末端连续8个碱基在待扩增区以外不能有完全互补序列，预混PCR酶，否则易导致非特异性扩增。引物3‘端的碱基，特别是*末及倒数第二个碱基，应严格要求配对，*佳选择是G和C。

引物的5′端可以修饰。如附加限制酶位点，引入突变位点，用生物素、荧光物质、地1高辛标记，加入其它短序列，包括起始密码子、终止密码子等。

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