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荧光分光光度计测试注意事项

①样品应盛在四面透光的石英比色皿（荧光池）中，如果是挥发性样品应使用带塞的荧光池。

②在荧光分析时，为了得到稳定且可靠的数据，一般需要开机预热氙灯大约30min。如果仪器光源采用的是闪烁氙灯，预热时间可以缩短到10min左右。对某些易感光、易分解的荧光物质，尽量采用长波长、低人射光强度及短时间光照。

③温度变化可引起荧光强度的改变。通常降低温度，有利于提高荧光量的子产率，荧光强度*。温度影响荧光强度的显著程度因样品而异，大部分荧光物质的荧光强度受温度影响不大，测试温度变化不超过±3℃，对测试结果几乎无影响。

④当荧光物质是弱酸或弱碱时，溶液的pH对荧光强度有较大影响。因为弱酸或弱碱在不同酸度中，分子和离子的电离平衡会发生改变，而荧光物质的荧光强度会因其离解状态发生改变。

⑤分子结构中存在π-π共轭的荧光物质在*性溶剂中，Edinburgh荧光光谱仪价格，荧光效率显著增强。溶液中表面活性剂的加入能够显著提高荧光强度。

⑥瑞利散射和拉曼散射是溶剂的两种散射光，应注意不要误把瑞利散射和拉曼散射光谱当做荧光光谱。瑞利散射光波长与激发光波长相同，拉曼散射与激发光波长不同，荧光光谱仪价格，而荧光物质的荧光波长与激发光波长无关，因此可以通过选择适当的激发波长将拉曼散射光与荧光分开。在测试时选择合适的狭缝宽度，或者空白扣除，也可以对散射光的影响进行校正。

⑦荧光物质分子与溶液中其它物质分子之间作用导致荧光强度降低，常见的荧光猝灭剂，如卤素离子、*离子、硝基化物质、重氮化合物等。

⑧测试过程中注意不要肉眼盯着氙灯光源看，Techcomp荧光光谱仪价格，以防眼睛造成损伤。

⑨仪器房应注意经常通风，避免产生的臭氧在室内富集。

荧光光谱特点

灵敏度更高 g/ml，应用不如UV广泛。应用：①直接荧光光度法②作为HPLC的检测器（用的多）根据物质分子吸收光谱和荧光光谱能级跃迁机理，具有吸收光子能力的物质在特定波长光（如紫外光）照射下可在瞬间发射出比激发光波长长的光，即荧光。 分子受特定光照射后处于激发态的 分子返回基态时发出荧光， 其荧光强度与 呈线性关系， 从而可测出气体浓度。当检测仪器系统确定后，荧光总光强I与 浓度的之间的关系可表示为：I=KC在稳定的条件下，这些参数也随之确定，k可视为常数。因此，式中I=kC表示的紫外荧光光强I与样气的浓度C成线性关系。这是紫外荧光法进行定量检测的重要依据。

荧光光谱仪

根据波兹曼 （Boltzmann）分布，分子在室温时基本上处于 电子能级的基态。当吸收了紫外-可见光后，基态分子中的电子只能跃迁到激发单重态的各个不同振动-转动能级，根据自旋禁阻选律， 不能直接跃迁到激发三重态的各个振动-转动能级。处于激发态的分子是不稳定的，通常以辐射跃迁和无辐射跃迁等方式释放多余的能 量而返回至基态，发射荧光是其中的一条途径。振动弛豫（vibrational relexation）是处于激发态各振动能级的分子通过与溶剂分子的碰撺而将部分振动能量传递给溶剂分子，其电子则返回到同一电子激发态的低振动能级的过程。由于能量不是以光辐射的形式放出，爱丁堡荧光光谱仪价格，故振动弛豫属于无辐射跃迁。振动弛豫只能在同一电子能级内进行，发生振动弛豫的时间约为 秒数量级。内部能量转换（ internal conversion）简称内转换，是当两个电子激发态之间的能量相差较小以致其振动能级有重叠时，受激分子常由高电子能级以无辐射方式转移至低电子能级的过程。