核酸纯化-友名生物

提取DNA常用的方法

　　一.酚抽提法：先用蛋酶K、SDS*碎细胞，消化蛋白，然后用酚和酚-氯DNA大小为100-150kb

　　二.甲酰胺解聚法：*碎细胞同上，然后用高浓度甲酰胺解聚蛋白质与DNA的结合，再透析获得DNA可得DNA200kb左右。

　　三.玻璃棒缠绕法：用盐酸胍裂解细胞，将裂解物铺于乙醇上，然后用带钩或U型玻璃棒在界面轻搅，DNA沉淀液绕于玻棒。生成DNA约80kb。

　　四.异丙1醇沉淀法：基本同1法，仅用二倍容积异丙1醇替代乙醇，可去除小分子RNA(在异丙1醇中可溶状态)

　　五.表面活性剂快速制备法：用Triton X-100A或NP40表面活性剂*碎细胞，然后用蛋白酶K或酚去除蛋白，乙醇沉淀或透析。

　　六.加热法快速制备：加热96℃-100℃，五分钟，核酸纯化，然后离心后取上清，可用于PCR反应。

　　七.碱变性快速制备：先用NaOH作用20分钟，再加HCI中和，离心后取上清，含少量DNA。

DNA提取过程中各种*的作用及原理

溶液III--3mol/L NaAc(pH4.8)溶液：

　　NaAc的水溶液呈碱性，为了调节pH至4.8，必须加入大量的冰醋酸。 所以该溶液实际上是NaAc-HAc的缓冲液。用pH4.8的NaAc溶液是为了把pH12.6的抽提液，调回pH至中性， 使变性的质粒DNA能够复性，并能稳定存在。而高盐的3mol/L NaAc有利于变性的大分子染色体DNA、 RNA以及SDS-蛋白复合物凝聚而沉淀之。前者是因为中和核酸上的电荷，减少相斥力而互相聚合.

从动物组织中提取*组DNA

使用研钵进行匀浆时：

① 取1～100 mg的动物组织或人组织移入冰浴预冷的研钵中，快速用力展研成匀浆。注）下列组织请加液氮研磨至粉末状。

A．富含DNA酶的胰脏、脾1脏、胸腺、淋巴等组织。

B．富含胶原蛋白的皮肤、肌腱等组织。

C．富含角质蛋白的组织或坚硬的组织（如骨骼）等。

② 加入650 μl的Solution A和0.9 μl的RNase A1，温和研磨30秒钟。注）使用上述①-注）的实验材料时，请在加入Solution A及RNase A1后，将研钵置于65℃水浴上研磨1分钟。

③ 收集650 μl研磨好的组织匀浆液移至Collection Tube中。如果匀浆体积不足650 μl，请补充Solution A至650 μl，65℃保温5分钟。

使用研磨棒进行匀浆时:

① 取1～100 mg的动物组织或人组织移入冰浴预冷的Collection Tube 中，用研磨棒快速研磨成糊状。

② 加入350 μl的Solution A和0.9 μl的RNase A1后用研磨棒快速研磨成匀浆。

③ 加入350 μl的Solution A将研磨棒上的匀浆冲入Collection Tube中，充分振荡混合后，65℃保温5分钟。