生物素亲和*-武汉友名生物公司
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- 名称武汉友名生物技术有限公司 【公司网站】
- 所在地中国
- 联系人 董先生
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价格
面议
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- 采购量 不限制
- 发布日期 2021-07-01 10:05 至 长期有效
生物素亲和*-武汉友名生物公司产品详情
总RNA的抽提方法:
目前常用的方法是用异硫qing酸胍苯1酚抽提法。
提取步骤:
先用液氮研磨材料,匀浆,加入Trizol*,进一步*碎细胞并溶解细胞成分。然后加入氯1仿抽提,离心,分离水相和有机相,收集含有RNA的水相,通过异丙1醇沉淀,获得比较纯的总RNA,用于下一步mRNA的纯化。也可将含有RNA样品的细胞*碎液通过硅胶膜纯化柱纯化。
RNA浓度和纯度判断:
OD260为1时相当于浓度为50 ug/mL;
OD260/0D280值在1.8~ 2.0之间,表示纯度较好;
0D260/OD280值低于1.8,样品有蛋白质或酚污染;
0D260/0D280值大于2.0,提取的RNA可能有降解;
电泳后如果rRNA大小完整,而且28S rRNA和18SrRNA亮度接近2:1、mRNA分布均匀,则认为RNA。
在选用支原体PCR法检测来替代药典方法时,需要考虑如下两个方面:
首先一步是要使用符合欧洲药典要求,经过全方面验证的支原体检测*盒,第二部是自我验证,即确认所用的样本基质对于该*盒方法是合适的,并且操作过程是正确的。小规模的室内验证通常需要采用三个不同批次的*盒,然后加入10CFU的标准品,做复孔(通常是8个复孔),并且至少选择3个支原体物种进行验证。
有的支原体标准品厂家会提供CFU与*拷贝数的比值,以方便二者的换算。因为10CFU只能确定PCR能够达到的检测限在10CFU以下,但无法具体确定灵敏度的数值。带DNA拷贝数标定的*组DNA标准品则可进一步确定检测限的数值。
总之,PCR方法很有用,但需要避免假阴性,验证时应使用阳性对照、阴性对照、无模板对照和内控对照,以保证PCR反应正常,生物素亲和*,以及支原体少量存在时确实能检出来,支原体不存在时也确保是结果阴性,从而使得PCR方法在工业应用时能确保*终结果的可靠。
【从植物材料或植物培养细胞中提取*组DNA】
① 按下表称取适量的新鲜植物材料(如选用的是冷冻干燥植物材料,则用量减半),剪成小块放入研钵中,加入液氮,待样品冷冻完全后快速、用力研磨至粉末状。研磨时应间断加入液氮以防止材料融化。
植物材料使用量 植物花、叶片10~100 mg 植物茎60~240 mg 植物根80~240 mg 植物种子80~240 mg 如选取植物的根、种子等样品时,因其*组DNA含量很低,需使用超过表格中所示的参数用量,此时请分两管进行步骤1~6的实验操作,在步骤7的操作中再将各管溶液分次加入至同一Spin Column中过滤,使各管的*组DNA结合到同一个Spin Column上。如从培养的植物细胞中提取*组DNA,请离心收集2×103~1×107的培养植物细胞,加入150 μl水充分悬浮细胞后移入研钵中,加入液氮后快速、用力研磨至粉末状。
注)样品研磨应充分,否则将会严重影响*组DNA的收率。
② 将研钵移至65℃水浴,当样品粉末刚开始融化时,向研钵中加入700 μl的Solution A和1.2 μl的RNase A1,用力碾磨30秒。
③ 收集650 μl研磨好的组织匀浆移至Collection Tube中。如匀浆体积不足650 μl,请补充Solution A至650 μl。65℃保温15分钟。注)处理富含纤维的根/茎等植物材料或富含淀粉、蛋白质的种子等时,可延长水浴时间至60分钟。
生物素亲和*-武汉友名生物公司由武汉友名生物技术有限公司提供。武汉友名生物技术有限公司在其它这一领域倾注了诸多的热忱和热情,友名生物一直以客户为中心、为客户创造价值的理念、以品质、服务来赢得市场,衷心希望能与社会各界合作,共创成功,共创*。相关业务欢迎垂询,联系人:董先生。
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