广东制备液相色谱分离纯化-武汉赛尔夫科技公司(图)

水有保证 可以不过滤？

原因有以下两点点：

（1）流动相过滤在理论上有好处，但是实际操作时由于不可能做到专瓶*，反而容易造成的交叉污染，对于配比复杂的流动相影响更大。

（2）流动相过滤在经济成本上不划算。买一套过滤装置要6000多元，且过滤器公认是比较容易损坏的设备。是过滤片的成本太高，一片就要几十元。按一般液相柱的正常使用寿命计算，过滤片的成本会远远高于色谱柱的成本上升。

反相色谱影响因素(1)柱长有机小分子和肽类的分辨率随柱长的增加而增加．但是柱长增加并不能使蛋白质和核酸等生物大分子的分辨率显著增加．它们在较短的柱子上往往也有很好的分离效果。(2)流动相的流速。有机小分子和肽类的分辨率对流动相流速非常敏感。而蛋白质和核酸等生物大分子的分辨率则不然。流速越小，柱子越长，色谱峰的宽度就越大，分辨率就越小。制备色谱上样过程中的流速对动态吸附容量影响很大。(3)温度。温度上升，流动相黏度下降，流动速度加快，且流动相与固定相之间的传质速度加快，使分辨率增加。同时，温度上升，分子热运动增加，疏水性作用减弱。升高温度要考虑目标物质的热稳定性。(4)流动相组成。流动相的*性越大，制备液相色谱分离纯化，溶质的分配系数越大，洗脱时间越长。RPC多采用降低流动相*性(水含量)的线性梯度洗脱法。水是*性强的溶剂，在反相色谱中常常和基础溶剂配合使用，向流动相中加入不同浓度的、可以与水混溶的有机溶1剂，以得到不同强度的流动相，这些有机溶1剂称为修饰剂。反相色谱中的有机溶1剂。此外，乙醇、四氢呋1喃、异丙1醇及二氧六环也常被用作修饰剂。有机溶1剂梯度的大小也会影响分辨率，一般梯度越小，分辨率越大。



液相色谱仪流动相性质： 1、底剂决定基本的色谱分离，洗脱剂对某几个组分选择分离。流动相组成改变，*性改变，可显著改变组分分离状况。 2、亲水性固定液常采用疏水性流动相，即流动相的*性小于固定相的*性，称为正相液液色谱，*性柱称正相柱，正相柱的底剂用低*性溶剂，洗脱剂用*性较强的溶剂。 3、若流动相的*性大于固定液的*性，称为反相液液色谱。非*性柱称为反相柱，反相柱常以水为流动相的主体，再加入不同配比的有机溶1剂做调节剂。



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