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随着科学技术的发展以及生产实践的需要,层析技术也得到了迅速的发展。这里就不得不提到两位在层析技术发展做出重要贡献的人,他们是英国生物学家马丁(Martin)和辛格(Synge)。是他们首先提出了色谱塔板理论。色谱塔板理论其实是基于热力学近似的理论,这个理论中涉及的对象有目标分离物,色谱柱。这里色谱柱好比是一个分馏塔。理论是这样的:将目标分离物倒入“分馏塔”,这样就会在分馏塔板间移动,在每一个塔板内组分分子在固定相和流动相之间形成平衡,随着流动相的流动,组分分子不断从一个塔板移动到下一个塔板,并不断形成新的平衡。谱柱的塔板数越多,则其分离效果也就越好。这个分离过程提升分离效率,并且定量的进行描述,分析这个分离过程。

  这是个进步,并且马丁(Martin)和欣革(Synge)还提出更为远见卓识的预言:1、流动相可用气体代替液体,因为与液体相比,分离时候,物质间作用力更小,对分离也就更有好处。2、若能够使用非常细的颗粒填料,制备液相,并在色谱柱两端施加较大的压差,从而增加了理论培板数,这将会大大提高分离效率。






分配层析在支持物上形成部分互溶的两相系统。一般是水相和有机溶1剂相。常用支持物是硅胶、纤维素和淀粉等,这些亲水物质能储留相当量的水。被分离物质在两相中都能溶解,但分配比率不同,展层时就会形成以不同速度向前移动的区带。

离子交换层析支持物是人工交联的带有能解离基团的有机高分子,如离子交换树脂、离子交换纤维素、离子交换凝胶等。带阳离子基团的,如磺酸基(—SO3H)、羧(—CH2COOH)和*基等为阳离子交换剂。带阴离子基团的,如DEAE—(二胺)和QAE—(四级胺)等为阴离子交换剂。离子交换层析只适用于能在水中解离的化合物,包括有机物和无机物。对于蛋白质、核酸、氨基酸及核苷酸的分离分析有的分辨力。离子交换基团在水溶液中解离后,能吸引水中被分离物的离子,各种物质在离子交换剂上的离子浓度与周围溶液的离子浓度保持平衡状态,各种离子有不同的交换常数,K值愈高,被吸附愈牢。洗脱时,增加溶液的离子强度,如改变pH,增加盐浓度,离子被取代而解吸下来。洗脱过程中,按K值不同,分成不同的区带。




色谱法

定义 色谱法又称色层法或层析法,是分离和鉴定化合物的有效方法。

应用

(1)分离混合物 在*提取物的有效部位中,往往含有结构相似、理化性质相似的几种成分的混合物,用一般的化学方法很难分离,可用色谱法将它们分开。

(2)精制化合物 在提取、分离得到有效成分时,往往含有少量结构类似的杂质,不易除去,也可利用色谱法除去杂质得到纯品。

(3)鉴定化合物 在一定条件下,纯粹的化合物在薄层色谱或纸色谱中都有一定的Rf值,在气相色谱和液相色谱中有一定的保留时间,所以利用色谱法可以鉴定化合物的纯度或利用标准品的对照来初步确定两种性质相似的化合物是否为同一物质。






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