*酶elisa检测*盒_CAT*盒

仅供科研使用，不得用于临床检验。

*酶（CAT）定量检测*盒（ELISA）

说明书

货号：INS-10014249

    使用前，请务必仔细阅读说明书，如有不清楚的，请拨打24h技术支持专线：0714-6338558或18108699172，咨询清楚再进行实验。

黄石市艾恩斯生物科技有限公司

网址：www.inselisa*

电话：0714-6338558

【产品名称】

通用名称：*酶（CAT）定量检测*盒（ELISA）

英文名称： Catalase ELISA KIT

【包装规格】

48人份/盒，96人份/盒

【预期用途】

仅供科研使用，定量检测各样本中*酶（CAT）的浓度。

【检验原理】

本*盒采用双*夹心酶联****吸附试验（ELISA）。在预包被**酶（CAT）*（固相*）的微孔酶标板中，加入*酶（CAT）校准品和待测样本，再加入另一株HRP标记的**酶（CAT）*（酶标*），经过温育与充分洗涤，去除未结合的组分，在微孔板固相表面形成固相*-*原-酶标*的夹心复合物。加底物A和B，底物在HRP催化下，产生蓝色产物，在终止液（2M *）作用下，****终转化为*，在*上测定吸光度（OD值），吸光度（OD值）与待测样品中*酶（CAT）的浓度正相关。拟合校准品曲线，可以计算出样本中*酶（CAT）的浓度。

【主要组成成分】

主要成分

校准品浓度依次为：80、40、20、10、5、2.5 U/mL。校准品已经通过测试，结果表明HBs*原阴性，HIV1、HIV2和HCV*阴性，由于不存在一种试验方法能够完全保证没有这些物质，本品必须按照具有潜在的*性进行处理，处理过程应当遵循通用的安全措施。

需要但未提供的材料及耗材

  1、能够检测 450 nm 吸光度的*。

2、精密移液器及一次性吸头

3、蒸馏水或去离子水

4、洗瓶或者自动*

5、37℃水浴锅或恒温箱

6、1L量筒

7、无粉一次性乳胶手套

8、稀释用聚*试管

【储存条件及有效期】

  1、2-8℃保存，切勿冷冻，有效期6个月。

  2、开封使用后，包被微孔板放入带有干燥剂的自封袋中，密闭自封袋，并将全部*放回2-8℃冰箱。

  3、开封后，按照建议的条件保存，校准品、包被微孔板和HRP标记*，有效期为28天，其他成分在标签标明的有效期内是稳定的。

【适用仪器】

  半自动的*，如Thermo MK3，或者国产*。

【样本要求】

  样本类型和采集

以下只是列出样品采集的一般指南。所有样本采集过程中，不得使用叠氮钠做为防腐剂。

1、细胞培养上清：4000rpm条件下离心20min，去除细胞颗粒和聚合物，上清液保存在- 20℃以下，避免反复冻融。

2、血qing：使用不含热原和内*的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，4000rpm条件下离心20min，小心地分离出血qing，保存在- 20℃以下，避免反复冻融。

3、血浆：肝素，EDTA，或柠檬酸钠作为*凝剂。在4000rpm条件下，离心20分钟取上清，血浆保存在-20℃以下，避免反复冻融。

样本保存和稳定性

样本在2-8℃条件下，可以储存72h，或者在- 20℃储存6个月。样本收集后，不是一次检测完，请按一次用量分装冻存，避免反复冻融，使用时在室温下解冻，确保样品均匀充分解冻。

【*准备】

1、使用前，所有的组分都要至少复温30min，确保充分复温到室温。

2、浓缩洗涤液：从冰箱取出的浓缩洗涤液，会有结晶产生，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解。浓缩洗涤液与蒸馏水，按1:20稀释，即1份的浓缩洗涤液，添加19份的蒸馏水。

3、底物：底物液A和B，在使用前，按1:1体积充分混合，混合后15分钟内使用。

操作程序

1、所有*和组分都先恢复到室温，标准品、质控品和样品，建议做复孔。

2、按前面*准备中描述的方法，配制好*盒各种组分的工作液。

3、从铝箔袋中取出所需板条，剩余的板条用自封袋密封放回冰箱。

4、设置标准品孔、样本孔和空白孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL，样本孔加待测样本50μL，空白孔不加。

5、除空白孔外，标准品孔和样本孔，加入辣根过氧化物酶标记的检测*100μL。

6、用封板膜盖住反应板，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

7、揭开封板膜，弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置20s，甩去洗涤液，吸水纸上拍干。

8、如此重复4次（共洗板5次）。若使用自动*，请按*操作程序进行洗板，添加浸泡20s的程序，可以****检测的精度。洗板结束，加底物前，要在干净不掉屑的纸上，充分拍干反应板。

9、将底物A和B按1:1体积充分混合，所有孔中加入底物混合液100μL。用封板膜盖住反应板，37℃水浴锅或恒温箱温育15min。

10、所有孔加入终止液50μL，在*上读取各孔吸光度（OD值）。

 【检验结果的解释】

检测完成后，以标准品浓度做为纵坐标，对应的吸光度（OD值）作为横坐标，利用计算机软件，采用四参数Logistic曲线拟合（4-pl），创建标准曲线方程，通过样本的吸光度（OD值），利用方程计算样品的浓度值。

如果样品被稀释，通过上述方法测的的浓度值，要乘以稀释倍数，才是样品的****终浓度。

【产品性能指标】

1、物理性能

*盒的各液体组分应澄清透明、无沉淀或者絮状物。微孔板铝箔袋应真*装，无*损漏气。

2、剂量反应曲线线性

校准品剂量反应曲线相关系数r值，大于等于0.9900。

3、精密度

批内精密度：三组已知的高、中、低浓度样品，进行二十次在同一个板块内精度评估。批内变异系数CV%小于10%。

批间精密度：三组已知的高、中、低浓度样品，进行二十次在不同板块内精度评估。批间变异系数CV%小于15%。

4、灵敏度

****小检出剂量小于0.1 U/mL。

5、回收率

三组已知的高、中、低浓度样品，进行五次回收率评估，回收率在85%-115%之间。

6、特异性

本*盒识别天然和重组*酶（CAT），与结构类似物无交叉。

稳定性

    2℃-8℃保存，有效期6个月。

【注意事项】

生物安全

1、检测必须符合实验室管理规范的规定，严格****交叉污染，所有样品、洗弃液和各种废弃物都应按照*物进行处置。

2、*盒的液体组分中，含有proclin-300防腐剂，可能引起*反应，避免吸入烟雾与皮肤接触。

3、底物液对皮肤、眼睛和上呼吸道有刺激作用，避免吸入烟雾。戴上防护手套，实验完成后*洗手。

4、*盒中的终止液为酸性溶液，在使用终止液时，请佩戴防护服，及防护眼睛、手及面部的设施。

5、本*盒用于科学研究，不能用于诊断****。

6、请不要使用其他批号或其他来源的*替代本*盒中的*。

技术要点

1、重溶或者混合蛋白溶液时，避免起泡。

2、加标准品与样本时，每个标准品浓度和样本都要更换移液枪头，公共组分应该悬臂加样，避免交叉污染。

3、合适的温育时间，和充分的洗涤步骤，是保证实验结果准确性的必要条件。

4、底物溶液为无色液体，保存过程中变为蓝色，代表底物溶液已经失效，不得使用。

5、终止液加样顺序与底物溶液加样顺序一致，加入终止液后，蓝色底物产物，会瞬间变为*。

6、实验中，用剩的板条，应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。

7、所有液体组分，使用前充分摇匀，严格按照说明书标明的时间、加样量及加样顺序进行温育操作。

废物处理

  所有使用或未使用的*，所有污染性的一次性材料，应当遵循*性或潜在*性产品的处理程序，每个实验室都有责任根据其实验的类型和危险性级别，进行废物和污物的处理，同时要严格依照有关规定对待所有的废物和污物。

【基本信息】

  企业名称：黄石市艾恩斯生物科技有限公司

  生产地址：湖北省黄石市黄石港区磁湖路41号

  固定电话：0714-6338558

  网    址：www.inselisa*

  邮    箱：*tmaster@inselisa*