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测序仪

北京拓普塞斯生物技术有限公司成立于 2008 年，是湖北三七七生物技术有限公司的全资子公司，我司自成立至今始终致力于各种类型的生物学仪器的销售、维修维护等服务。如测序仪、合成仪、扩增仪、蛋白纯化仪、自动工作站和气相色谱质谱联用仪等，dna测序仪，公司尤其在 ABI 各种型号的*分析仪方面有丰富的维修维护经验。

测序仪原理：

商用二代测序的方法（method）有不少名字，例如pyrosequencing、I*emiconductor sequencing等等都是商业称谓，但是如果从生化的角度上大体都可归入SBS和/或SBL（取决于使用聚合酶还是连接酶）。序仪的原理到底如何，这个问题实在是太广，详细展开只怕要专门写一本书。我试着从基本逻辑的层面上为大家阐释一下DNA测序的目的和实现手段；具体每一种方法的详细原理稍后再为大家列出一些补充资料。

北京拓普塞斯生物专注测序仪销售与维修服务，主营产品型号：有373测序仪、377测序仪、310测序仪、3700测序仪和3100测序仪型等dna测序仪。欢迎您致电联系我们获取更多优惠~~~

测序仪之*/乙醇法纯化pcr产物

北京拓普塞斯生物技术有限公司成立于 2008 年，是湖北三七七生物技术有限公司的全资子公司，我司自成立至今始终致力于各种类型的生物学仪器的销售、维修维护等服务。如测序仪、合成仪、扩增仪、蛋白纯化仪、自动工作站和气相色谱质谱联用仪等，公司尤其在 ABI 各种型号的*分析仪方面有丰富的维修维护经验。

(1) 将混合物离心，将扩增产物转移到1.5ml ep管中。(2) 加入25μl*/乙醇混合液，充分振荡，置冰上10min以沉淀dna。12 000r/min于4℃离心30 min，测序仪，小心弃上清。(3) 加70%(v/v)的乙醇50μl洗涤沉淀2次。12 000r/min于4℃离心5min，小心弃上清和管壁的液珠，真空干燥沉淀10～15min。电泳前测序pcr产物的处理(1) 加入12μl的tsr于离心管中，剧烈振荡，让其充分溶解dna沉淀，稍离心。(2) 将溶液转移至盖体分离的0.2ml pcr管中，稍离心。(3) 在pcr仪上进行热变性(95℃ 2min)，冰中骤冷，待上机。

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二代测序仪的操作流程

北京拓普塞斯生物技术有限公司成立于 2008 年，是湖北三七七生物技术有限公司的全资子公司，我司自成立至今始终致力于各种类型的生物学仪器的销售、维修维护等服务。如测序仪、合成仪、扩增仪、蛋白纯化仪、自动工作站和气相色谱质谱联用仪等，公司尤其在 ABI 各种型号的*分析仪方面有丰富的维修维护经验。

1）测序文库的构建（Library C*truction）

　　首先准备*组DNA（虽然测序公司要求样品量要达到200ng，但是Gnome Analyzer系统所需的样品量可低至100ng，能应用在很多样品有限的实验中），然后将DNA随机片段化成几百碱基或更短的小片段，并在两头加上特定的接头（Adaptor）。如果是转录组测序，则文库的构建要相对麻烦些，RNA片段化之后需反转成cDNA，然后加上接头，或者先将RNA反转成cDNA，然后再片段化并加上接头。片段的大小（Insert size）对于后面的数据分析有影响，可根据需要来选择。对于*组测序来说，通常会选择几种不同的insert size，以便在组装（Assembly）的时候获得更多的信息。

　　2）锚定桥接（Surface Attachment and Bridge Amplification）

　　Solexa测序的反应在叫做flow cell的玻璃管中进行，flow cell又被细分成8个Lane，第二代测序仪，每个Lane的内表面有无数的被固定的单链接头。上述步骤得到的带接头的DNA 片段变性成单链后与测序通道上的接头引物结合形成桥状结构，以供后续的预扩增使用。

　　3）预扩增（Denaturation and Complete Amplification）

　　添加未标记的dNTP 和普通Taq 酶进行固相桥式PCR 扩增，单链桥型待测片段被扩增成为双链桥型片段。通过变性，释放出互补的单链，锚定到附近的固相表面。通过不断循环，将会在Flow cell 的固相表面上获得上百万条成簇分布的双链待测片段。

　　4）单碱基延伸测序（Single Base Extension and Sequencing）

　　在测序的flow cell中加入四种荧光标记的dNTP 、DNA 聚合酶以及接头引物进行扩增，在每一个测序簇延伸互补链时，每加入一个被荧光标记的dNTP就能释放出相对应的荧光，测序仪通过捕获荧光信号，并通过计算机软件将光信号转化为测序峰，从而获得待测片段的序列信息。

　　5）数据分析（Data Analyzing）

　　这一步严格来讲不能算作测序操作流程的一部分，abi*测序仪，但是只有通过这一步前面的工作才显得有意义。测序得到的原始数据是长度只有几十个碱基的序列，要通过生物信息学工具将这些短的序列组装成长的Contigs甚至是整个*组的框架，或者把这些序列比对到已有的*组或者相近物种*组序列上，并进一步分析得到有生物学意义的结果。

北京拓普塞斯生物专注测序仪销售与维修服务，主营产品型号：有373测序仪、377测序仪、310测序仪、3700测序仪和3100测序仪型等dna测序仪。