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等电点未知时，可参照电泳分析的结果。在中性和偏碱性条件下电泳时向阳****移动较快的物质，钢衬PP管道，同样条件下可被阴离子交换剂吸附；向阴****移动或向阳****移动较慢的物质，同样条件下可被阳离子交换剂吸附。但有时有例外，因为某一物质的层析行为，除与分子的净电荷有关外，还与它的分子大小、分子结构和电荷排列等有关。对于等电点未知的蛋白质，还可用阴离子交换剂和阳离子交换剂分别在较高pH(如pH 8．6)和较低pH(如pH 5．5)条件下进行离子交换实验，观察交换吸附的情况。