生物切片|求精教学|****生物切片

显示葡萄糖-6-****酶（G-6-Pase）活性的铅法：

（Glucosel-phosphate phosphohydrolase）

①酶的*及其生物学意义：

该酶主要位于内质网，是内质网的标志酶。G-6-Pase参与糖代谢，能水解葡萄糖-6-****而释放出葡萄糖和****。

⑵原理：G-6-Pase将底物（葡萄糖-6-****钾盐）水解产生****离子，后者被孵育液中的****所捕获，****终反应物为颗粒状的硫化铅沉淀，其反应式如下：

酶Pb(NO3)2

葡萄糖-6-****钾+H2O葡萄糖+****

⑶结果：酶活*呈棕色硫化铅颗粒沉淀。在光镜下G-6-Pase活性颗粒较均匀地分布于胞质中。

石蜡包埋切片制作法

这是****常用的切片法。以石蜡作为*的填充支持介质，将整块*加以包埋，****后凝固成均匀一致的固态结构。用切片机制取****薄的切片。为了让石蜡能浸入*内部，需将*经过脱水等处理。过程大致如下：

⑴固定：生物标本脱离机体或培养环境，细胞会发生自溶，*分解。因此，需用固定剂处理，使蛋白质凝固停止濒死或死后变化。凡供*保存的标本都需经固定处理。

常用的固定剂是甲醛、乙醇等，能使蛋白质凝固。还有由几种*配成的固定液，例如Carnoy固定液，由无水酒精、****、冰醋酸配成，固定力更快更强，不含水分，可避免水溶性物质如糖原等在固定过程中损失。

固定液有多种，由一种化学物质组成者，称为单纯固定液；由多种化学物质组成者称为混合固定液。甲醛是****常用的一种单纯固定液，它对*的主要作用是使*硬化和防腐，对*的穿透力强，固定均匀，*收缩较少，能保持*细胞的固有形态，染色后颜色清晰。但甲醛放置日久后，可自行分解，产生甲酸，使溶液呈酸性，影响细胞核着色。因此，在备用的甲醛溶液中加入某些小剂量的中和剂，使溶液呈中性（或弱碱性），称其为中性甲醛。中性甲醛属于混合固定液。用中性甲醛固定*，更有利于保持*的*原性，有利于*****化学标记物的检测，并可避免甲醛色素的形成，但不能保存*内尿酸盐类结晶。乙醇也是一种单纯固定剂，有固定兼脱水的作用，但其渗透力较弱，固定速度较慢，易使*变脆，另外，乙醇能使核蛋白质沉淀，核蛋白质被沉淀后能溶于水，不利于染色体的固定，是核着色不良，影响形态学的观察，故乙醇一般不作常规固定液应用。